| 生化学実験はIn vitro実験とも呼ばれるように生体細胞の細胞器官内で生じる生化学反応を、複雑な代謝経路や調節機構から切り離してまさに試験管のなかで再現することで研究が進展してきた。 |
Biochemical experiments, as their other name of 'in vitro' experiments suggests, have advanced research by replicating the chemical reactions inside the organelles of an organism's cells, separate from complex metabolic pathways, regulatory mechanisms, etc., in literal test tubes. |
| 21世紀に入ると標識化技術や測定技術の進歩で生きている細胞内で生化学反応を間接的に追跡することも可能になってきたが、生体組織から目的の成分を分離精製する実験技術は生化学研究においては重要な研究技術である。 |
Since the beginning of the 21st century improvements in labelling and measurement technologies have made it possible to indirectly trace the biochemical reactions inside living cells, but experimental techniques that isolate and purify target compounds from biological tissues are an important research technology for biochemical research. |
| 一般に消化酵素やホルモンのように分泌型の生体物質でない限りは、酵素や受容体を含めて目的の生体物質は特定の組織細胞の特定の細胞小器官にのみ発現・存在している。 |
Except for generally secretory biomolecules like digestive enzymes or hormones, target biomolecules including enzymes and receptors are only expressed and present in specific organelles of specific tissue cells. |
| したがって、生化学実験は標的組織を多数採集し、そこから目的の生体物質を分離精製するところから始まる。 |
Therefore, biochemical experiments start by collecting multiple samples of target tissue and isolating and purifying the desired biomolecule from there. |
| DNAのように細胞破砕後に、エタノール沈澱するだけで捕集できるものもあるが多くの場合、細胞破砕後に密度勾配法による遠心分離で目的の細胞内器官を密度により選択し捕集する。 |
There are some things, such as DNA, that can be collected simply by ethanol precipitation after cell lysis, but in most cases, after cell lysis, the target intracellular organelles are selected according to density, using density gradient based centrifugal separation, and collected. |
| 溶液には塩化セシウムなどが用いられる。 |
Caesium chloride, for example, is used for the solution. |
| この状態では多くの場合、酵素や受容体は細胞膜に取り込まれていたり、膜の二重層に埋め込まれているので、界面活性剤を使って脂質膜と分離〈可溶化〉する必要がある。 |
Generally in this state, the enzyme, receptor, etc. may be incorporated into the cellular membrane, embedded in the the membrane bilayer, or so on, therefore it is necessary to use surfactants to separate (solubilise) them from the membrane lipids. |
| 目的の生体高分子の精製は古くは半透膜による透析が行われたが、20世紀後半にはゲル濾過クロマトグラフィーやアフィニティークロマトグラフィーにより目的物を精製する。 |
The purification of biopolymers was performed by dialysis across a semipermeable membrane in the past, but in the latter half of the 20th century, target substances are purified by things like gel filtration chromatography or affinity chromatography. |
| 代謝による生体内物質の移動や変化の追跡にはトレーサー物質が利用される。 |
When tracking the metabolic movements and transformations of biomolecules throughout an organism, a tracer substance is utilised. |
| 古くから放射性あるいは非放射性同位体を組み込んだ生体内物質が広く利用された。 |
Radioactive or non radioactive isotope containing biomolecules have been widely used for some time. |
| しかし同位体置換した生体内物質を用意することは困難をともない、放射性トレーサーの場合はラジオアイソトープセンターなど専用実験施設が必要な為、今日では抗体染色やELISA法など同位体を使用しないトレーサーが広く利用されている。 |
However, because preparing isotope laced biomolecules in vivo comes with difficulties and in the case of radioactive tracers dedicated experimental facilities like a radio isotope center is needed, these days tracers that don't use isotopes, such as immunostaining or the ELISA method, are used. |
| また、微量機器分析技術の進展によりMALDI法などの質量分析でクロマトグラフィ・スポット（ピーク）から直接、標的物質の同定も可能である。 |
Alternatively, due to advances in microanalytic machine technology it has now become possible to identify target substances directly from the chromatographic spots (peaks) of a mass spectrometry analysis like the MALDI method. |
| イオンチャネルの研究においては、生体膜にガラスの毛細管を押し当てることで、管内にイオンチャネルを閉じ籠めて生化学実験を行うパッチクランプの実験技術によって上記のように生体成分を分離せずに実験を行う技法も開発された。 |
In the field of ion channel research, through patch clamp experiment technologies, which experiment biochemically by sticking a glass capillary tube onto a biomembrane, thereby isolating the ion channel inside the tube, techniques that perform experiments without separating the biological components, unlike the previously mentioned techniques, have also been developed. |
| 1990年代以降には特定の無機イオンに反応して蛍光を発する標識色素やルシフェラーゼ遺伝子を応用した形質導入によって、細胞外から蛍光顕微鏡で発光現象を追跡することで間接的に生化学反応をトレースすることも可能になってきている。 |
Since the 1990's, due to things like labelling pigments that display fluorescence in response to specific inorganic ions or transduction by using luciferase genes, it has become possible to indirectly trace biochemical reactions by tracking the appearance of luminescence from outside the cell using a fluorescence microscope. |
